Ожог плодовых впервые зарегистрирован в Беларуси.

Wed, 04 Jun 2008 18:11:26 GMT

ВНИМАНИЕ!!!
В Беларуси впервые была обнаружена опасная инфекция растений - бактериальный ожог плодовых.

Впервые в Беларуси сотрудниками кафедры молекулярной биологии был выделен патогенный микроорганизм из пораженного материала, предоставленного Институтом Защиты Растений НАН Беларуси. Возбудитель инфекции идентифицирован как бактерия Erwinia amylovora при помощи разработанной на кафедре методики ПЦР-диагностики, а также классическими микробиологическими методами. На данный момент очаги заражения выявлены в Мядельском и Узденском районе Минской области.
Бактериальный ожог плодовых является карантинным заболеванием для Беларуси, поэтому убедительная просьба, ознакомьтесь с симптомами данной болезни и при подозрении на бактериальный ожог в вашем саду, сообщите по следующим адресам:

Кафедра молекулярной биологии БГУ
проспект Независимости, 4, 220030, г. Минск, Беларусь;
evtushenkov@bsu.by
Тел. +375 172 095 848.

"Институт защиты растений"
ул. Мира, 2, 223011, п. Прилуки, Минский р-н, Беларусь;
belizr@tut.by
Тел(факс)+375 17 5092339

Подробнее об ожоге плодовых.

Введение

Распространение и вредоносность

Пути и способы распространения

Места резервации и специализация

Цикл развития болезни

Признаки поражения ожогом плодовых

Влияние климатических условий на развитие болезни

Культурально-морфологические и биохимические свойства возбудителя

Определение и выделение возбудителя ожога

Ссылки

Введение. Бактериальный ожог считается одним из наиболее опасных заболеваний плодовых культур. Болезнь вызывается бактерией Erwinia amylovora (Burrill) Winslow et al и поражает как культурные, так и дикорастущие растения семейства розоцветных.

Несмотря на значительные усилия по борьбе с бактериальным ожогом во всем мире, болезнь по-прежнему вызывает большие потери урожая и гибель деревьев. Для Беларуси и Российской Федерации Erwinia amylovora является карантинным объектом, бактериальный ожог плодовых распространился в непосредственной близости от границ СНГ: в Турции, Болгарии, Чехии, Словакии, Польше, Латвии. Характерные симптомы бактериального ожога (экссудат, образование язв и согнутых побегов, “мраморность” на срезе коры и др.) облегчают его диагностику, однако, заболевание можно спутать с другим, похожим на ожог заболеванием,— бактериальным раком, или некрозом коры плодовых деревьев, которое вызывается бактерией Pseudomonas syringae.

Распространение и вредоносность. Впервые вспышка бактериального ожога плодовых была отмечена в конце XVIII века на востоке США, в штате Нью-Йорк. За полтора столетия возбудитель распространился по всей Северной Америке. В настоящее время заболевание встречается в CШA, Канаде, Новой Зеландии, Мексике, Гватемале, Чили, Великобритании, Египте, Нидерландах, Польше, Дании, в Бельгии, Франции, Германии, Люксембурге, на Кипре, в Израиле, Турции, Швеции, Норвегии, Ирландии, Греции, Чехии, Словакии, Ливане, Швейцарии. В последние годы найдены очаги бактериального ожога в Болгарии, Югославии, Южной Италии, на Бермудских о-вах, Гаити и Зимбабве, Латвии. В 1989 г.бактериальный ожог обнаружен в Армении, где были уничтожены десятки гектаров грушевых и айвовых деревьев. В ФРГ в 1971 г. было выкорчевано 18 тыс. деревьев при общей стоимости затрат 350 тыс. марок. В 1972 г. та же сумма была затрачена вторично. В Голландии было выкорчевано около 8 га насаждений груши, а также почти 21 км живой изгороди из боярышника и сожжено приблизительно 175 тыс. его кустов. В 1991 г. бактериальный ожог плодовых нанес большой ущерб яблоневым садам (штат Мичиган), где потери были оценены более, чем в 3 млн. долларов (погодные условия в течение нескольких предыдущих лет благоприятствовали распространению болезни). Экономический ущерб выражается не только в потерях урожая и гибели плодовых деревьев, но и в затратах на выкорчевку и восстановление садов.

Пути и способы распространения инфекции. Ожог плодовых распространяется с посадочным и прививочным материалом, инструментами при обрезке, переносится насекомыми-опылителями: пчелами, осами, мухами, сосущими насекомыми—тлями. Инфекция может передаваться с птицами, дождем, ветром и поливными водами. Источником заболевания могут служить инфицированные плоды и тара.

Места резервации и специализация. Возбудитель поражает культурные и дикорастущие растения из семейства розоцветных. Кизильник — самое восприимчивое к бактериальному ожогу растение, а среди плодовых деревьев больше всего страдает от заболевания груша. К наиболее восприимчивым растениям также относятся: боярышник, айва, яблоня, рябина. Поражаются ожогом плодовых редко или слабо: ирга, земляника, малина, роза, вишня, слива, черешня, абрикос и др.

Цикл развития болезни. Источником заболевания является экссудат, который в сырую погоду выделяется из пораженных тканей в виде капель молочного цвета. Экссудат легко вытягивается в тонкую нить и может переноситься на сотни километров с помощью дождя, ветра, птиц и насекомых. Частички экссудата, зараженная пыльца попадают на цветки плодовых деревьев. При благоприятных условиях (относительная влажность 70% и температура воздуха выше 18%) бактерии быстро размножаются в цветке, продвигаются через цветоножку во фруктовые шпорцы и в ветви. Ветви могут быть заражены через раны с дождем или во время садовых работ. Инфекция сохраняется в некротических язвах, во внешних тканях скелетных ветвей и штамба дерева. С наступлением весны бактерии становятся активными, из мокнущих некротических язв выделяется экссудат и цикл заражения повторяется.

Признаки поражения ожогом плодовых. Поражаются все надземные части дерева: почки, цветки, листья, побеги, ветви и штамб. Заболевание начинается с соцветий, а затем переходит на побеги и ветки. Почки не раскрываются, чернеют и засыхают, но не опадают. Цветки весной внезапно чернеют и увядают, оставаясь на дереве. Молодые веточки и листья начинают чернеть с кончиков, затем скручиваются и инфекция быстро распространяется вниз по дереву. Листья буреют и чернеют, но не опадают, оставаясь на дереве в течение всего периода вегетации. Дерево производит впечатление обожженного огнем. Кора размягчается, наблюдается выделение экссудата в виде капель жидкости молочно-белого цвета. Срез коры в таких местах имеет характерный “мраморный” рисунок с красновато-коричневым оттенком. Эпидермис пораженных мест отслаивается, образуя пузыри, кора растрескивается и граница между больной и здоровой участками коры становится четкой. Часто наблюдаются характерные симптомы — клиновидно очерченные язвы. На ветвях язвы быстро увеличиваются, распространяясь с верхней части кроны на ствол. Болезнь поражает и плоды, чаще незрелые; они чернеют, но так же, как и листья, не опадают, а остаются на дереве.

Симптомы бактериального ожога на яблоне в целом сходны с симптомами на груше, однако, листья здесь преимущественно красно-коричневого цвета, и болезнь распространяется вдоль ветвей медленнее. На кизильнике симптомы заболевания обычно сходны с симптомами на груше, но пораженная внутренняя ткань более светло-коричневого цвета и красноватый оттенок менее выражен. Признаки поражения бактериальным ожогом на боярышнике, в целом, сходны с симптомами на груше. Обычно наблюдается увядание молодых пораженных побегов. Желто-коричневые язвы появляются на побегах на следующий год после инфицирования. Листья на таких побегах часто сморщиваются и могут опадать.

Влияние климатических условий на развитие болезни. Ожог плодовых проявляется обычно ранней весной на цветущих деревьях. Оптимальными условиями для развития болезни в период цветения является относительно высокая влажность (70%) и температура выше +18 С^o.

Летом, в связи с повышением температуры воздуха, развитие болезни как бы приостанавливается, кора ссыхается, и появляются так называемые зоны ожога, четко отделенные от здоровых тканей. С дождем и ветром бактерии, содержащиеся в каплях экссудата, переносятся на большие расстояния и при благоприятных условиях погоды (высокая влажность воздуха) и наличии повреждений на листьях и побегах вызывают заражение. Этим объясняется резкое усиление заболевания после бури с градом.

Культурально-морфологические и биохимические свойства возбудителя.
Возбудитель заболевания — бактерии Erwinia amylovora (Burrill) Winslou et al. Это подвижные перитрихиальные палочки, размером 0,7-0,1х0,9-1,5 мкм, спор и капсул не образуют; расположены одиночно, парами и короткими цепочками, грамотрицательные, некислотоустойчивые аэробы или факультативные анаэробы.

На мясо-пептонном агаре колонии круглые, маленькие, с ровными краями, иногда опалесцирующие, белые, блестящие, маслянистой консистенции. На мясо-пептонном бульоне образуют небольшую зернистую пленку, при этом бульон мутнеет. Желатин разжижают медленно, молоко створаживают также медленно и более или менее пептонизируют. Лакмусовое молоко не окрашивают, лакмус частично редуцируют, нитраты не восстанавливают, крахмал не разлагают. Образуют кислоты на глюкозе, сахарозе, лактозе и глицерине без выделения газа. Сероводород, индол и аммиак не образуют. Очень слабо растут или совсем не растут на средах Ушинского и Кона. Оптимальная температура для развития бактерии 30°С, погибают при 43,7°-50С. В чистых культурах бактерии могут иметь S и R —формы, из которых S—гладкая авирулентная форма, а R— складчатая вирулентная форма.

Определение и выделение возбудителя ожога. Первым показателем возможной причины болезни является общая картина поражения, однако точное определение возбудителя на основе симптомов можно дать только в редких случаях, и поэтому часто возникает необходимость в проведении более детальных исследований, с выделением возбудителя в чистую культуру.

Для бактериологического анализа, подтверждающего наличие Erwinia amylovora в растении следует отбирать свежие образцы. Лучше всего возбудитель выделяется из коры плодовых, взятой на границе клиновидной язвы, а также из бактериального экссудата, и согнутых кончиков молодых побегов; не следует брать для анализа отдельные сухие листья и растительный материал, длительное время хранившийся во влажных условиях.

Выделение возбудителя. Из пригодного для анализа образца, предварительно промытого водопроводной и стерильной водой, вырезают кусочек на границе больной и здоровой ткани. Его помещают в стерильную воду, тщательно растирают в ступке и мацерат наносят на поверхность питательной среды (картофельно-глюкозный или мясо-пептонный агар) в чашки Петри. Чашки ставят в термостат при температуре 28-30°С. Через 48 часов инкубации проверяют рост бактерий и колонии, похожие на Erwinia amylovora переносят в пробирки со скошеной средой Кинга (состав среды: 1 л дистиллированной воды, 20 г пептона, 15 г мытого долгунцового агар-агара, 10 мл глицерина, 1,5г К НРО и 1,5 г MgSO x 7H 0. Все это стерилизуют при давлении 1,5 атм. в течении 20 мин.). Если штамм окрашивает среду Кинга в флюоресцирующий зеленый цвет, то он относится к роду Pseudomonas. Бактерии рода Erwinia такого флюоресцирующего пигмента на этой среде не образуют.

Окраска по Граму. Для распознавания грамположительных и грамотрицательных бактерий используют быстрый метод Рью, где реагентом служит 3%-ный раствор КОН, который наносится на предметное стекло в количестве 1-2-х капель. Одну петлю исследуемой культуры вносят в каплю щелочи и растирают, наблюдая за ее вязкостью. Если культура становится вязкой и тянется за петлей на расстояние 1,5-2 см и более, то испытуемая культура — грамотрицательная. Грамположительные культуры не дают вязких образований и за петлей не тянутся.

Реакция сверхчувствительности. Для постановки реакции сверхчувствительности по Клементу отбирают нефлюоресцирующие грамотрицательные штаммы, 24-48-часовую культуру смывают 10 мл стерильной воды и готовят суспензию, содержащую 10 - 10 клеток в 1 мл. С помощью шприца суспензию вводят в межклеточное пространство листа табака Nicotiana tabacum или комнатной герани Pelargonium zonala. Контроль — инъекция стерильной воды на том же растении-индикаторе. В том случае, если суспензия содержит фитопатогенные бактерии через 12-24 часа в месте инфильтрата образуется некроз. Бактерии сапрофиты не вызывают отмирание ткани и лист остается без внешних изменений.

Тест на патогенность. Одновременно с постановкой реакции сверхчувствительности проверяют патогенность штаммов на молодых незрелых плодах груши по методу Уайта. Этот тест является одним из основных при определении возбудителя ожога. Суспензию бактерий (концентрация 10⁸ клеток/мл) сначала наносят на плод груши и затем в этом месте его три раза накалывают энтомологической булавкой под кожицу, на разную глубину. Операцию повторяют несколько раз. Затем накапывают бактериальную суспензию и помещают во влажную камеру (для этой цели лучше использовать закрытые кристаллизаторы со стерильной ватной подстилкой). Контроль—уколы на отдельной груше со стерильной водой. Если через 2 суток в местах уколов появляются некротические пятна и выделяется молочно-белый экссудат, то считают, что выделенные бактерии действительно являются Erwinia amylovora. Флюоресцирующие бактерии — Pseudomonas syringae вызывают некроз ткани груши без выделения экссудата. Груши собирают незрелыми и хранят в холодильнике в течение 5-6 месяцев.

Молекулярно-биологические методы. Включают в себя различные серотологические исследования - агглютинационный тест, иммунофлуоресценцию, иммуноферментный анализ (ELISA), полимеразную цепную реакцию (ПЦР) со специфическими праймерами, макрорестрикцию хромасомальной ДНК XbaI рестриктазой и последующий пульс-гель-электрофорез (PFGE).

Ссылки
1. Способ выявления карантинных бактерий “Erwinia amylovora” и “Ralstonia solanacearum” - http://www.bsuproduct.by/index.php/.32.983...0.0.0.html
2. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ДИАГНОСТИКЕ ОЖОГА ПЛОДОВЫХ КУЛЬТУР, ВЫЗЫВАЕМОГО Erwinia amylovora (burRill) winslow ЕТ al - http://mcxpx.ru/base_gvc/karantin/document/008-1.html
3. Растительная инфекция в Латвии - "Молодежь Эстонии" - 20.07.07 - http://www.moles.ee/07/Jul/20/3-3.php
4. DIAGNOSIS OF Erwinia amylovora - http://www.csl.gov.uk/specialInterest/Erwinia.pdf
5. Plant Disease Diagnosis - Melissa B. Riley, Margaret R. Williamson, and Otis Maloy - http://www.apsnet.org/online/feature/plantdisease/
6. Fire Blight of Apple and Pear - http://www.al.gov.bc.ca/cropprot/tfipm/fireblyt.htm 7. Fire Blight - Tree Fruit & Berry Pathology - http://www.nysaes.cornell.edu/pp/extension/tfabp/firepm.shtml

Кафедра молекулярной биологии Биологического факультета БГУ.

Ожог плодовых впервые зарегистрирован в Беларуси.